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本制品采用优质原料配制，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经典常用的细胞组织快速裂解液。裂解液中已含常用蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂混合物。

本蛋白裂解液适用于从各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织样品中提取总蛋白。得到的蛋白样品可以用于WB、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本裂解液提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。本裂解液中不含有EDTA，与金属螯合层析等下游应用兼容。本裂解液提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒，也可将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。

• 使用方便，从细胞、组织提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 总蛋白提取液含多种有效成分，可充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
  
• 实验中试剂须预冷；器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 如果试剂不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
  
• 注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

• 细胞裂解
  
  • 每5～10×10⁶个细胞，在4℃,1000×g条件下离心5～10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
    
  • 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
    
  • 每5×10⁶个细胞中加入500μL冷的裂解液，混匀后，在4℃条件振荡15～20分钟。
    
    • 每10⁶个细胞，大约10mg或10μL压积，加100μL蛋白裂解液。大约相当于6孔板的每孔加入100μL～150μL，或一个75m2培养瓶加1mL。裂解液和细胞应充分接触。如果蛋白裂解液不足量，细胞裂解效率会降低。
      
    • 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
      
    • 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  • 在4℃,12000×g条件下离心10分钟，。
    
  • 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
• 组织裂解
  
  • 裂解液制备：每1mL冷的蛋白裂解液加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
    
  • 取100mg组织样本剪碎，加1mL裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
    
  • 将组织匀浆在4℃振荡15～25分钟。
    
    • 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
      
    • 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  • 在4℃,12000×g条件下离心10分钟，。
    
  • 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
    上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
    
    • 建议用BCA法进行蛋白定量。
      
    • 蛋白样品-80℃存放一年没有问题，注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长蛋白裂解液的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解液的时间即可。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为裂解液中中含有干扰Bradford法的组分，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取时出现胶状沉淀？
  蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组分，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。